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注：終止液和顯色劑具有腐蝕性，一旦接觸到液體，請(qǐng)盡快用大量清水沖洗。
產(chǎn)品介紹 Mouse TNF-α ELISA Kit (Mouse Tumor Necrosis Factor-α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠腫瘤壞死因子α ELISA 試劑盒，可以定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 TNF-α濃度。TNF-α是一種主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的單核因子。小鼠的 TNF-?基因長(zhǎng)約 2.78 kb，由 4 個(gè)外顯子和 3 個(gè)內(nèi)含子組成。小鼠 TNF-?前體含 235 個(gè)氨基酸殘基，信號(hào)肽為 79 氨基酸殘基。成熟的小鼠 TNF-?分子量為 17 kDa，由 156 個(gè)氨基酸殘基組成，第 69 位和 100 位兩個(gè)半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵，有一個(gè)糖基化點(diǎn)，但糖基化不影響其生物學(xué)功能。鼠與人的 TNF-?有 79％氨基酸組成同源性，TNF-?的生物學(xué)作用無(wú)明顯的種屬特異性。小鼠的 TNF-?是由活化的巨噬細(xì)胞及其它類(lèi)型的細(xì)胞，包括 T 細(xì)胞和 B 細(xì)胞，NK 細(xì)胞，LAK 細(xì)胞，星形膠質(zhì)細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生。TNF-α的生物學(xué)活性非常復(fù)雜，包括對(duì)造血、免疫和炎癥的調(diào)節(jié)；對(duì)血管和凝血的影響和對(duì)多種器官（肝、心臟、骨、軟骨、肌肉和其它組織）的作用。如殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞；提高中性粒細(xì)胞的吞噬能力，增加過(guò)氧化物陰離子產(chǎn)生，增強(qiáng) ADCC 功能，刺激細(xì)胞脫顆粒和分泌髓過(guò)氧化物酶；抗感染；促進(jìn)髓樣白血病細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化；促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化等。在臨床上，應(yīng)用 TNF 在治療腫瘤等方面開(kāi)始臨床Ⅱ 期試驗(yàn)，也可與 IL-2 聯(lián)合治療腫瘤。TNF-α的抗腫瘤作用包括 TNF-α的直接作用和 TNF-α誘導(dǎo)的針對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答。TNF-α參與包括哮喘，Π型糖尿病，Crohn’s 病，和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。TNF 刺激內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致炎癥、組織損傷和凝血從而誘發(fā)感染性休克。TNF-α又稱(chēng)惡液素，可誘發(fā)機(jī)體發(fā)生惡液質(zhì)。TNF 還具有類(lèi)似 IFN 抗病毒作用，阻止病毒早期蛋白質(zhì)的合成，從而抑制病毒的復(fù)制，并與 IFN-α和 IFN-γ協(xié)同抗病毒作用。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)樣品中小鼠 TNF-α濃度。在小鼠TNF-α單克隆抗體預(yù)包被酶標(biāo)板中加入適度稀釋的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，其中的TNF-α?xí)c其單抗結(jié)合，洗去游離成分；加入生物素化的抗小鼠TNF-α抗體，抗小鼠 TNF-α抗體與結(jié)合在單抗上的小鼠TNF-α結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，洗去游離的成分；加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親合素，生物素與親合素特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物；加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有TNF-α，辣根過(guò)氧化物酶會(huì)使無(wú)色的顯色劑出現(xiàn)藍(lán)色；加終止液變?yōu)辄S色。在450 nm下測(cè)OD值，小鼠TNF-α濃度與OD 450值之間呈正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中小鼠TNF-α濃度。
UE-M6152S/M6152M/M6152L◆沒(méi)有信號(hào)？1.試劑添加順序錯(cuò)誤或試劑配制不正確。重復(fù)實(shí)驗(yàn)；檢查試劑配制方法；復(fù)核試驗(yàn)試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復(fù)溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍(lán)色？1.洗板不充分或跳過(guò)洗滌步驟未去除殘留的非結(jié)合過(guò)氧化物酶。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)洗滌流程操作。2.底物溶液預(yù)混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲(chǔ)液槽重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲(chǔ)液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標(biāo)準(zhǔn)曲線差？1.鏈親和素-HRP結(jié)合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用酶標(biāo)板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測(cè)抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時(shí)間不足。延長(zhǎng)底物溶液孵育時(shí)間。5.實(shí)驗(yàn)操作流程有誤。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作流程。6.標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋計(jì)算錯(cuò)誤。重新計(jì)算制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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